熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
五味子甲(標準品)基吡啶

五味子乙（標準品）吡啶甲

五味子甲素(標準品)Boc-L-高氨酸

五味子乙素(標準品)1,二氯

五味子酯甲(標準品)N-甲基環(huán)己

西貝母（標準品）N-

西紅花苷，α-藏花素(標準品)肼

西紅花苷I（標準品）甲

西紅花苷II（標準品）基硫

細葉遠志皂苷（標準品）2-基吡啶

仙鶴草酚B（標準品）5-溴吲哚

血根(標準品)甲基芐

香草酸(標準品)間羥基甲

香草酸芐基*基氫氧化銨

香蒲新苷（標準品）2-氯-5-硝基茴香

香葉木素-7-O-葡萄糖苷（標準品）烏洛托品

香紫蘇(標準品)*

小檗(標準品)硫酸鎳七水合物
地霉屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復合亞單位B1抗體ocludin-5/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白-5抗體IgG100 ul

三酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體CLDN3/Claudin 3/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白3抗體IgG20 ul

甲胎蛋白抗體CLDN4/Claudin 4/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白4抗體IgG500 ul

毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體CLDN5/FITC  熒光素標記緊密連接蛋白5抗體IgG100 ul

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白2抗體CLEC-1/CLEC1A/FITC  熒光素標記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體IgG100 ul

肌動蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3抗體CLEC-2/CLEC1B/FITC  熒光素標記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體IgG20 ul

酸性鈣調(diào)蛋白3抗體CLEC2D/OCIL/FITC  熒光素標記CLEC2D蛋白抗體IgG100µl

酸化CD156b抗體CLEC5A/MDL1/FITC  熒光素標記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族5成員A抗體IgG100 ul

乙脫氫酶5抗體CLEC13D/MMR1/CD206/FITC  熒光素標記巨噬細胞甘露糖受體抗體IgG300 ul